khmlss.com

Today find the cause - Tomorrow find the cure

Society for Khorasan Razavi Clinical Laboratory Employees

تکنیکهای نوین

در صورت آشنائی با تکنیکهای نوین آزمایشگاهی در مقالات و سایتهای اینترنت، آن را به آدرس الکترونیکی ما ارسال نمائید.

آزمايش ثبوت مكمل

Fixation (CF) Complement

اصول . در مرحله اول براي انجام آزمايش ثبوت مكمل سه عنصر مورد نياز است: سرم بيمار (آنتي بادي) كه بايد قبلاً مكمل آن حذف گردد، يك آنتي ژن تجاري و مقدار معيني مكمل، در اين مرحله مكمل به آنتي بادي سرم مي چسبد در مرحله دوم آزمايش،گلبولهاي قرمز گوسفند حساس شده به مخلوط اضافه ميشود عدم وجود مكمل آزاد (در اثر اتصال به آنتي بادي هاي سرم) منجر به عدم ليز گلبولهاي قرمز گوسفند و مثبت شدن آزمايش مي گردد. اگر در سرم بيمار آنتي بادي وجود نداشته باشد مكمل هاي آزاد باعث ليز شدن گلبولهاي قرمز گوسفند و منفي شدن آزمايش مي شود.

آزمايش آگلوتيناسيون مستقيم

Direct Agglutination (DAT)

اصول . از آزمايش آگلوتيناسيون مستقيم براي تشخيص آنتي بادي در سرم بيمار مي توان استفاده كرد. معمولاً سرم بيمار به انگلهاي كشت داده شده اضافه ميكنند و وجود يا عدم وجود توده اي شدن انگل ها مورد بررسي قرار مي گيرد.

آزمايش ايميونوفلورسانس مستقيم

Direct Immunofluorescence (DIF)

يا آزمايش آنتي بادي فلورسانت مستقيم

Direct Fluorescent Antibody (DFA)

اصول . براي انجام اين آزمايش، ميكروسكوپ فلورسانت مورد نياز است. نمونه سرم حاوي آنتي ژنهاي انگل را روي لام ريخته سپس به آن مونوكلونال آنتي بادي متصل به ماده فلورسانت تجارتي اضافه مي كنيم سپس با استفاده از ميكروسكوپ فلورسانت كمپلكس آنتي ژن، آنتي بادي فلورسانس شده مورد مطالعه قرار ميگيرد.

آزمايش الايزا (ELISA)

(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)

اصول . آزمايش اليزا براي تشخيص آنتي بادي تعدادي از ميكروارگانيسمها از جمله انگلها طراحي شده است. در اين آزمايش آنتي ژنهاي اختصاصي در كف چاهك ميكروپلت ، بيد يا لوله آزمايش چسبانده و سرم بيمار به آن اضافه مي گردد. پس از شستشو، ماده حاوي آنتي هيومن IgG كونژوگه شده با يك آنزيم به آن اضافه مي شود. مخلوط را مجدداً شستشو داده اگر سرم حاوي آنتي بادي اختصاصي باشد معمولاً با آنتي ژن اختصاصي و همچنين آنتي هيومن IgG متصل مي شود. در نهايت با اضافه كردن يك ماده رنگ زا مي توان درحضور آنزيم رنگ خاصي ايجاد نمود كه با ابزاري همانند اسپكتوفتومتر و يا با چشم غيرمسلح مي توان تغيير رنگ را مشاهده كرد. با تغيير اين روش مي توان به تكنيك خاصي تحت عنوان ((ساندويچ دوبل)) دست يافت كه از آن مي توان براي تشخيص آنتي باديها IgM برعليه توكسوپلاسما گونده اي استفاده كرد. در اين روش، در كف چاهك ميكروپليت معمولاً آنتي باديها IgM آنتي هيومن نشانده مي شود سپس سرم بيمار به آن اضافه كرده و مي شورند سپس آنتي ژن اختصاصي را به آن مي افزايند و در نهايت ماده تجارتي حاوي كونژوگه آنتي بادي ـ آنتي ژن و آنزيم به اضافه مي شود بقيه مراحل آن مشابه الايزاي عادي است و نتيجه با دستگاه اسپكتوفتومتر قرائت مي شود.

توضیحات بیشتر / انیمیشن

آزمايش ژل ـ ديفيوژن

Gel Diffusion Precipitin (GOP)

اصول . در اين آزمايش از ژل آگار استفاده مي شود معمولاً آنتي ژن اختصاصي و سرم بيمار را در دو حفره نزديك به هم ژل آگار قرار مي دهند. در اينصورت آنتي ژن و آنتي بادي در ژل نفوذ كرده و به سمت يكديگر مهاجرت مي نمايند و در نقطه تلاقي متوقف شده و رسوب كرده در نتيجه خطي رسوبي را ايجاد مي نمايند. به اين آزمايش روش اشترلوني (Ouchtelony) يا دبل ديفيوژن در ژل (DDA) نيز اطلاق مي گردد.

آزمايش ايميونوفلورسانس غيرمستقيم

Indirect Immunofluorescence (IIF)

يا ايميونوفلورسانت آنتي بادي غيرمستقيم

Indirect Immunofluorescent Antibody (IFA)

اصول . اساس آزمايش IFA يا IIF برتشخيص آنتي بادي بيمار در نمونه سرم است. بدين منظور از آنتي ژن اختصاصي و سرم بيمار را بر روي لام قرار مي دهند تا اين دو با هم تركيب شوند. پس از يك مرحله شستشو، ايميونوگلوبولين آنتي هيومن متصل به رنگ فلورسين را به لام اضافه ميكنند پس از شستشوي مجدد و خشك كردن لام در صورت وجود آنتي بادي، آنتي ژن اختصاصي و كونژوگه آنتي هيومن به آنتي بادي متصل مي شوند در اينصورت با استفاده از ميكروسكوپ فلوسنت ميتوان اين اتصال را مشاهد كرد.

آزمايش هماگلوتيناسيون غيرمستقيم

Indirect Haemagglutination (LHA)

اصول . براي انجام اين آزمايش سرم بيمار و گلبولهاي قرمز گوسفند كوت شده با آنتي ژن اختصاصي مورد نياز است. در اينصورت سرم و آنتي ژن بهم متصل ميشوند و آگلوتيناسيون اتفاق مي افتد.

آزمايش وسترن ايميونوبلاتينگ

Western Immunoblotting

اصول . براي انجام اين آزمايش از نمونه هاي مختلفي از بيمار همانند CSF و سرم استفاده مي شود. با استفاده از روش الكتروفورز ، DNA بدست آمده از نمونه بيمار را بر روي ژل پلي اكريل آميد انتقال مي دهند و بدين صورت آنتي ژن هاي پروتئيني بر روي ژل از يكديگر جدا مي گردد. در بلاتينگ باندهاي پروتئيني روي ژل بر روي كاغذ منتقل مي شود. سپس محلول حاوي آنتي بادي ليبل شده با ماده راديواكتيو به كاغذ اضافه مي كنند. درنتيجه باندها را با كمك روشهايي نظير اتصال به نشانگرهاي فلورسانت يا پروب هاي ليبل شده با آنزيم مي توان مشاهده كرد. از اين روش مي توان در تشخيص ژيارديازيس استفاده كرد .

آزمايش پروب هيبريداسيون

(DNA Probe) DNA

اصول . اساس اين آزمايش براين پايه استوار است كه هرموجودي داراي ترادف اسيدنوكلئيك منحصر به فرد است . درنتيجه از يك اسيد نوكلئيك متصل شده به ماده راديواكتيوي مي توان به عنوان پروب استفاده كرد. نمونه بيمار از قبيل سرم يا مدفوع را قبلاً آماده مي كنيم . بدين ترتيب كه نمونه را بر روي غشاء نيتروسلولزي قرار داده و تثبيت مي كنيم سپس به آن پروب اضافه كرده تا اسيد نوكلئيك هر دو با هم هيبريد شوند. پس از يك مرحله شستشو، غشاء از لحاظ دارا بودن باقيمانده راديواكتيو مورد آزمايش قرار ميدهد.

آزمايش تغييرات طول قطعات DNA محدود شده با آنزيم (RFLPS)

Restriction Fragment Length Polymorphisms

اصول . در اين آزمايش قطعه خاص از DNA مورد آزمايش قرار مي گيرد براي انجام اين كار قطعه DNA را تحت تأثير آنزيمهاي آندونوكلئازي قرار مي دهند اين آنزيم ها قادرند ترادف بازي DNA را در يك نقطعه اختصاصي بشكنند و با استفاده از پروب DNA مي توان آن قطعه را شناسايي كرد.

آزمايش فلوسيتومتري

Flow cytometry

اصول . در اين آزمايش از دستگاه خاصي به نام دستگاه فلوسيتومتري استفاده مي شود اين دستگاه قادر است تك تك سلولها و ميكروارگانيسم ها از جمله انگلها را شناسايي نمايد معمولاً نمونه را براي شناسايي وارد دستگاه ميكنند و دستگاه انگل را بر پايه خصوصيات سلولي و اندازه شناسايي مي كنند.

پروتکل فلوسیتومتری (برای سلولهای MNCخون محیطی)

آزمايش واكنش زنجيره پلي مرازي(PCR)

Polymerase Chain Reaction

اصول . از روش PCR براي تكثير قطعه كوچكي از DNA موجود زنده استفاده مي شود معمولاً نمونه DNA با پرايمر و آنزيم پلي مراز مخلوط ميشود . اگر قطعه هدف در نمونه باشد واكنش صورت گرفته و قطعه مورد نظر تكثير مي گردد. با استفاده از تكنيك الكتروفورز و يا DNA پروب مي توان قطعه را شناسايي كرد.

توضيحات بيشتر / انيميشن